pNPP法测脂肪酶活


这几天用的pNPP法测定脂肪酶活时,借鉴的是华中科技大学舒正玉博士论文《黑曲霉脂肪酶的酶学性质、基因克隆与表达及结构预测》中的方法:溶液 A(比色法测定脂肪酶活力):准确称量 0.062 g pNPP 加到 10 ml 异丙醇中,室温下超声波处理 6 min,使 pNPP 完全分散到异丙醇中,整个溶液呈乳白色。 溶液 B(比色法测定脂肪酶活力):1.51 g Tris 完全溶解到 200 ml 蒸馏水中,依次加入 1 ml Triton-X100,0.25 g 阿拉伯胶,0.72 ml 浓盐酸,磁力搅拌器混匀,pH 计测量,用稀盐酸调节 pH 值到 7.5,定容至 250 ml。4 ℃保存。
然后问题出现了,在溶液A+B 混匀后始终是透光率很低的溶液,用分光光度计方法测定时,很难得出可靠的吸光值。

之前找过虫友问了,特别热情(我也不好意思多番打扰人家),他方法中加了脱氧胆酸盐,我的没有。他说在加入Triton-X100 后就变澄清了,但是我的加了也没变化。找了好多帖子看了,都没找到原因及解决方法。有的帖子也是类似问题,但是在各位一番评论指导后,帖主就不管了,看帖子的人无从得知解决措施。
so,希望有经验的虫友们指点指点,检测方法不准,试验开展不动啊。
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chiraler

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把异丙醇的浓度降低在5%之内就好很多了,你试试看。

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